培养基的灭菌之道:揭秘湿热与过滤的奥秘
培养基是细菌生长繁殖所需的营养物质精心组合而成,根据其营养成分和用途,可分为基础、合成、营养、鉴别、选择和厌氧培养基。它们以固体、半固体或液体三种形式存在,每一种都有其独特之处。选择适宜细菌种类及培养目的的培养基至关重要。
灭菌之路
在实验室中,两种主要的灭菌方法分别是湿热灭菌和0.22μm微孔滤膜过滤除菌。这两者各有千秋,而高压蒸汽灭菌虽然工作强度较小且成本相对较低,但易造成营养素流失,并在多次无害物品添加(如无菌谷氨酰胺溶液,无害碳酸氢钠溶液等)过程中可能引起二次污染。大多数情况下,通过0.1~0.2μm孔径微孔滤膜进行过滤除尘已成为现代生物技术领域普遍采用的方法,这一方式能够有效减少培养基中的营養损失。
1.1 湿热的大法
蒸汽在冷却时释放巨大的潜能,其穿透力极强。湿热条件破坏了微生物蛋白质与核酸结构,使得酶功能丧失,最终导致微生物死亡。湿热灭菌效果取决于致死温度及其持久时间。在121℃下的15分钟高压蒸汽灭杀所有微生物并尽量保留营养素,同时不需要额外延长处理时间,以确保效果。此外,对于验证设备性能至关重要,以保证每一次高压滅燒操作都是完美無瑕。
1.2 过滤净化:细节决定成败
用于过滤净化的材料非常丰富,如聚醚砜(PES)、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚四氟乙烯(PTFE)以及醋酸纤维素硝酸纤维素等。不仅如此,还有正压过滤与负压过滤两种方式可供选择。正壓過濾因其快速過濾、高流速,不易產生氣泡等優點,更受欢迎。此外,一體式過濾器與筒式過濾芯也常被用於滅淨,這些工具配備不鏽鋼夾具或篩網,並且進行無害過濾處理至關重要。如果需要對少量樣本進行滅淨,可以選擇針頭型過濾器來完成這項工作。